В практике искусственного рыборазведения применяют три метода стимулирования созревания половых продуктов у производителей рыб: экологический, физиологический и эколого-физиологический (Мухачев, 2005).
Экологический метод разработан в 30–е годы академиком А. Н. Державиным. Применяется, главным образом при разведении осетровых, лососевых, окуневых и реофильных карповых рыб (Мухачев, 2005). Он считал, что при выдерживании производителей следует создавать условия внешней среды, соответствующие естественным, в которых происходит развитие половых продуктов. Поскольку в природе икра и сперма созревают во время хода рыбы на нерест против течения воды, то этот фактор А. Н. Державин считал основным, влияющим на ускорение созревания половых продуктов. Он рекомендовал для выдерживания и получения зрелых производителей использовать овальные садки длиной 25 м, шириной 6 м и глубиной до 1,2 м, в которых создавалось течение и имитировались речные условия (быстротоки и т. д.). На дно таких садков насыпается галька. Водоснабжение в садке механическое, расход воды 20 л/с. Улучшение циркуляции воды достигается устройством в средней части садка по его длине бетонной" стены протяженностью 19 м. В каждый садок помещают по 50 рыб, самок и самцов раздельно. Наряду с течением в садках создают благоприятный температурный и кислородный режим. Однако опыт работы с такими садками показал, что в них созревает только одна треть производителей, к тому же трудно определить момент, когда надо брать икру (Мильштейн, 1982).
Физиологический метод. Этот метод основан на инъекционном введении производителям препарата гипофиза. Хорошо зарекомендовал себя этот метод при разведении осетровых и карповых рыб.
Гипофиз — железа, расположенная у основания головного мозга. Гормоны гипофиза влияют на рост и развитие организма, на созревание половых продуктов. Заготавливают гипофизы в осенне-зимний период или ранней весной. Извлекаемый у рыб гипофиз помещают в сосуд с химически чистым ацетоном, который несколько раз меняют в течение 12 ч до полного обезжиривания гипофиза. Количество ацетона должно в 10—15 раз превышать объем гипофизов. Повторное использование ацетона недопустимо.
После обезжиривания гипофизы высушивают в затененном месте на фильтровальной бумаге и хранят в сухих плотно закрытых пробирках или целлофановых пакетах с этикетками.
В связи с постоянным ростом масштабов рыборазведения с каждым годом требуется все больше и больше гипофизов, поэтому учеными предложен ряд его заменителей. К числу таких заменителей относится хориогонин (хориальный гонадотропин). Хориогонин, вырабатываемый на заводах медицинской промышленности, в отличие от гормонов гипофиза можно точно дозировать.
Для инъецирования рыб высушенные гипофизы измельчают в фарфоровой ступке, разбавляют физиологическим раствором (6,5 г химически чистой поваренной соли, растворенной в 1 л дистиллированной воды) и растирают до получения однородной кашицы (суспензии). Полученную суспензию гипофиза вводят рыбе шприцем в мышцы спины. Необходимое количество гипофиза определяют в зависимости от температуры воды, пола, массы рыбы и активности препарата. Инъекции дают хорошие результаты только при нерестовых для данного вида рыб температурах воды и при завершении у производителей IV стадии зрелости половых продуктов.
Активность гипофиза определяют по методу Б. Ф. Гончарова. Он заключается в выдерживании пробы икры, отобранной у самки с помощью щупа, в физиологическом растворе с 0,1 %-ным раствором кристаллического альбумина. При добавлении определенного количества гипофиза у икринок растворяется зародышевый пузырек. Наименьшее количество гипофиза, вызвавшее растворение пузырька, является показателем активности гипофиза. Гипофизы рыб разных семейств обладают специфичностью действия. Так, положительная реакция у осетровых наблюдается только при введении им гипофизов, взятых у особей этого же семейства, или при введении гипофиза леща. У большинства видов лучшие результаты дает двукратное введение гипофиза. При первом (предварительном) инъецировании вводят от 1/8 до 1/3 всей дозы препарата. Оставшуюся часть гипофиза используют при второй (разрешающей) инъекции. Самцов, как правило, инъецируют один раз и вводят им в 2 раза меньше гипофиза, чем самкам (Черномашенцев, Мильштейн, 1983).
Прочие статьи:
Биосинтез
В процессе биологического синтеза ДНК на матрице аналогичной молекулы ДНК образуется такая же молекула, и количество ДНК удваивается. Поэтому процесс биосинтеза ДНК получил название редупликации или репликации.
Принцип комплементарности ...
Возможные ошибки и варианты методики
Некоторые линии клеток сливаются с трудом, если же все-таки необходимы именно такие комбинации, попытайтесь сделать следующее.
1. Варьируйте соотношение родительских клеток в диапазоне 1:10–10:1.
2. Попробуйте разный ПЭГ:
а) поменяйте ...
Конструирование рекомбинантных ДНК
Основными инструментами для молекулярного конструирования являются два типа ферментов:
а) рестриктирующие эндонуклеазы (рестриктазы), необходимые для получения фрагментов ДНК;
б) лигазы, служащие для сшивания (соединения) участков ДНК. ...