После отбора клонированных рекомбинантных молекул нужно охарактеризовать содержащуюся в них вставку. Для этого необходимо ответить на несколько вопросов. Прежде всего - действительно ли рекомбинантная молекула содержит нужный сегмент ДНК? Далее - включился ли сегмент целиком или только частично? Соответствует ли он во всех деталях геномной ДНК, из которой происходит? Является ли нужная последовательность функциональной? Мы рассмотрим разные подходы к характеризации клонированных фрагментов ДНК. Прежде всего нужно очистить рекомбинантную ДНК от ДНК клеток хозяина, РНК и белков. Эта процедура довольно проста и включает экстракцию, физическое разделение компонентов и ферментативное расщепление РНК и белков. Так, плазмидную ДНК можно отделить от геномной благодаря ее малому размеру и кольцевой структуре. Фаговую ДНК можно получить в свободном от клеточной ДНК виде путем очистки фаговых частиц и последующего выделения из них ДНК.
Прочие статьи:
ДНК-зависимые РНК-полимеразы
В соответствии с субъединичным составом РНК-полимеразы подразделяются на две группы. К первой группе относятся ферменты, состоящие только из одной субъединицы, среди них – РНК-полимеразы митохондрий и небольших бактериофагов, например SP6 ...
Энтропия
В словаре иностранных слов встречается следующее определение энтропии: энтропия [древнегреческое en в, внутрь +trope поворот, превращение] – 1) в физике – одна из величин, характеризующих тепловое состояние тела или системы тел; мера внут ...
Образование коралловых рифов и их характеристика как экосистемы
Медузы, образующиеся на гидрантах, называются гидроидными; тело их, обычно с ясно выраженной лучевою симметрией, имеет вид колокола, из центра вогнутой стороны которого свешивается длинный желудочный стебелек, на конце которого ротовое от ...