В ходе описываемых процедур для предотвращения потерь и поломок хромосом, для обеспечения температурного режима необходимо использовать пластиковые пипетки и пробирки. Клетки блокируют на стадии митоза, митотические хромосомы высвобождают воздействием гипотонического шока и гомогенизацией. Хромосомы очищают дифференциальным центрифугированием.
Таблица. Исходные растворы на CMGT
|
Среда для роста клеток и селективная среда |
NB. Трансфекцию необходимо проводить в средах с небольшим содержанием фосфатов, таких, как DMEM. Клетки, растущие в средах, обогащенных фосфатами, непосредственно перед проведением трансфекции пересейте на среду, бедную фосфатами. Среды, обогащенные фосфатами, можно использовать при глицериновом шоке |
|
Гипотонический раствор |
10 мМ Hepes 3 мМ хлорида кальция |
|
Раствор для трансфекции |
25 мМ Hepes 134 мМ хлорида натрия 5 мМ хлорида калия 0,7 мМ дигидрофосфата натрия 5 мМ глюкозы |
|
1,25 М хлорида кальция Раствор для отмывки |
25 мМ Hepes 134 мМ хлорида натрия 5 мМ хлорида калия 0,7 мМ дигидрофосфата натрия |
Прочие статьи:
Циолковский и Вернадский
Константин Эдуардович Циолковский и Владимир Иванович Вернадский, два великих русских ученых и мыслителей, два жизненных пути, мало схожих по внешним обстоятельствам, но очень близкие по идейному направлению творчества. Генеральная идея и ...
Роль коры больших полушарий в регуляции лактации
По данным Протасова Б.И. (1988), кора больших полушарий имеет прямой контакт с латеральным, маммилярным, вентромедиальным и паравентрикулярным ядрами гипоталамуса, в которых образуются рилизинг-гормоны либерины. В случае удаления влияния ...
Технология изготовления уксуса
После того как были рассмотрены стадии подготовки сырья и питательной среды, а также получения посевного материала можно непосредственно перейти к способам изготовления уксусной кислоты. ...