В ходе описываемых процедур для предотвращения потерь и поломок хромосом, для обеспечения температурного режима необходимо использовать пластиковые пипетки и пробирки. Клетки блокируют на стадии митоза, митотические хромосомы высвобождают воздействием гипотонического шока и гомогенизацией. Хромосомы очищают дифференциальным центрифугированием.
Таблица. Исходные растворы на CMGT
|
Среда для роста клеток и селективная среда |
NB. Трансфекцию необходимо проводить в средах с небольшим содержанием фосфатов, таких, как DMEM. Клетки, растущие в средах, обогащенных фосфатами, непосредственно перед проведением трансфекции пересейте на среду, бедную фосфатами. Среды, обогащенные фосфатами, можно использовать при глицериновом шоке |
|
Гипотонический раствор |
10 мМ Hepes 3 мМ хлорида кальция |
|
Раствор для трансфекции |
25 мМ Hepes 134 мМ хлорида натрия 5 мМ хлорида калия 0,7 мМ дигидрофосфата натрия 5 мМ глюкозы |
|
1,25 М хлорида кальция Раствор для отмывки |
25 мМ Hepes 134 мМ хлорида натрия 5 мМ хлорида калия 0,7 мМ дигидрофосфата натрия |
Прочие статьи:
Грибы - паразиты человека и животных, их строение и размножение
Существует около 100000 видов грибов, разнообразных по внешнему виду и строению. Среди грибов есть микроскопически малые и гигантские организмы. Продолжительность жизни грибов – от нескольких дней до десятков лет.
Грибы распространены во ...
Мустьерская стадия. Неандертальский человек
Ашельская культура сменяется мустьерской, получившей наименование от местонахождений в пещерах и гротах на берегу р. Везер близ Ле-Мустье (департамент Дордони, Франция). Иногда мустерское время выделяют из нижнего палеолита в особый «сред ...
Проспективное и ретроспективное консультирование
За медико-генетической помощью обращаются пациенты с самыми разнообразными проблемами. В зависимости от основной причины выделяют проспективное и ретроспективное консультирование.
В большинстве случаев поводом для обследования у врача-ге ...