В ходе описываемых процедур для предотвращения потерь и поломок хромосом, для обеспечения температурного режима необходимо использовать пластиковые пипетки и пробирки. Клетки блокируют на стадии митоза, митотические хромосомы высвобождают воздействием гипотонического шока и гомогенизацией. Хромосомы очищают дифференциальным центрифугированием.
Таблица. Исходные растворы на CMGT
|
Среда для роста клеток и селективная среда |
NB. Трансфекцию необходимо проводить в средах с небольшим содержанием фосфатов, таких, как DMEM. Клетки, растущие в средах, обогащенных фосфатами, непосредственно перед проведением трансфекции пересейте на среду, бедную фосфатами. Среды, обогащенные фосфатами, можно использовать при глицериновом шоке |
|
Гипотонический раствор |
10 мМ Hepes 3 мМ хлорида кальция |
|
Раствор для трансфекции |
25 мМ Hepes 134 мМ хлорида натрия 5 мМ хлорида калия 0,7 мМ дигидрофосфата натрия 5 мМ глюкозы |
|
1,25 М хлорида кальция Раствор для отмывки |
25 мМ Hepes 134 мМ хлорида натрия 5 мМ хлорида калия 0,7 мМ дигидрофосфата натрия |
Прочие статьи:
Инвазионные болезни рыб
Инвазионные болезни вызывают возбудители, относящиеся к животному миру. Протозойные болезни, вызываемые одноклеточными животными — простейшими.
· Костиоз, или костиазис
Возбудитель костиоза – очень мелкий жгутиконосец костия – Costia ne ...
Предпосылки эволюционной идеи
Жизнь на Земле… Богатство ее форм поразительно! Всегда ли формы жизни были такими, какими мы их наблюдаем сегодня, или в течение многих тысячелетий они прошли длинный путь развития? С древних времен люди по-разному отвечали на этот вопрос ...
Роль стрессосом как факторов выживания микроорганизмов
О кризисных явлениях в окружающей среде большинству бактерий сигналит особый центр. Этот центр чаще всего является крупной молекулой и назван «стрессосомой». Как правило, бактерия имеет в своём составе около 20 стрессомом, и, хотя ученые ...