В ходе описываемых процедур для предотвращения потерь и поломок хромосом, для обеспечения температурного режима необходимо использовать пластиковые пипетки и пробирки. Клетки блокируют на стадии митоза, митотические хромосомы высвобождают воздействием гипотонического шока и гомогенизацией. Хромосомы очищают дифференциальным центрифугированием.
Таблица. Исходные растворы на CMGT
|
Среда для роста клеток и селективная среда |
NB. Трансфекцию необходимо проводить в средах с небольшим содержанием фосфатов, таких, как DMEM. Клетки, растущие в средах, обогащенных фосфатами, непосредственно перед проведением трансфекции пересейте на среду, бедную фосфатами. Среды, обогащенные фосфатами, можно использовать при глицериновом шоке |
|
Гипотонический раствор |
10 мМ Hepes 3 мМ хлорида кальция |
|
Раствор для трансфекции |
25 мМ Hepes 134 мМ хлорида натрия 5 мМ хлорида калия 0,7 мМ дигидрофосфата натрия 5 мМ глюкозы |
|
1,25 М хлорида кальция Раствор для отмывки |
25 мМ Hepes 134 мМ хлорида натрия 5 мМ хлорида калия 0,7 мМ дигидрофосфата натрия |
Прочие статьи:
Основы строения волоса, микроскопирование объекта
Прежде чем приступить к выделению ДНК из исследуемого волоса, необходимо провести его микроскопирование и установить наличие или отсутствие луковицы волоса, а также по виду луковицы определить, живой или отмерший волос представлен на иссл ...
Взгляд К. Линнея на понятие о виде
К. Линнеи считал вид реальной и элементарной единицей живой природы. Он уточнил само понятие вида, привлекая для его не только морфологический, но и физиологический критерий (скрещиваемость между представителями одного вида и нескрещинаем ...
Гормональные, генетические и средовые факторы, регулирующие рост
Эндокринная система играет огромную роль в регуляции роста и развития, будучи одним из главных факторов, при участии которых заключенная в генах информация реализуется во взрослый организм с такой скоростью и в такой форме, как это допуск ...