Известно, что компетентные клетки способны включать большое количество донорной ДНК, причем одна реципиентная клетка может включать несколько разных молекул донорной ДНК в один геномный сайт. Этот феномен позволяет выделять компетентные субпопуляции из общей массы реципиентных клеток и маркировать геном млекопитающих. Если донорная ДНК смешана с плазмидной, кодирующей селективный для клеток млекопитающих маркер, селекция по плазмидному гену после трансфекции позволяет выделить популяцию трансфицированных клеток. Такое обогащение облегчает дальнейшую очистку реципиентных клеток. Этот прием оказался успешным при клонировании генов, кодирующих клеточные поверхностные антигены. В данном случае для обогащения использовали антитела, а для разделения субпопуляций клеток флуоресцентный сортер.
В реципиентных клетках ДНК плазмиды, содержащей селективный маркер, лигируется с донорной геномной ДНК. Это приводит к «маркированию» последовательности ДНК клетки млекопитающего и может упростить выделение донорного гена после нескольких повторных трансфекции.
В опытах по котрансфекции мы использовали смесь из 1 мкг плазмидной и 20 мкг геномной ДНК. Смесь готовили непосредственно перед добавлением хлорида кальция.
Прочие статьи:
Отряд китообразные (СЕТАСЕА.)
Отряд китообразные - резко отклонившаяся группа видных млекопитающих, внешне похожих на рыб, ко отличающихся от них теплокровностью, легочным дыханием, внутриутробным развитием, выкормом детенышей молоком и многими другими чертами,
70 мл ...
После человека
Изучая периодическое кратковременное уменьшение яркости некоторых близких звёзд нашей галактики, астрономы сделали вывод о том, что вокруг этих звёзд вращаются крупные планеты, размеры которых много больше самой крупной планеты солнечной ...
Философско-методологические
проблемы биологии
Рассмотрим философско-методологические проблемы биологии природа, структура, особенности биологического познания и знания;
сущность биологического закона;
как устроена научная теория, можно ли в биологии отыскать сходные единицы, которы ...