Известно, что компетентные клетки способны включать большое количество донорной ДНК, причем одна реципиентная клетка может включать несколько разных молекул донорной ДНК в один геномный сайт. Этот феномен позволяет выделять компетентные субпопуляции из общей массы реципиентных клеток и маркировать геном млекопитающих. Если донорная ДНК смешана с плазмидной, кодирующей селективный для клеток млекопитающих маркер, селекция по плазмидному гену после трансфекции позволяет выделить популяцию трансфицированных клеток. Такое обогащение облегчает дальнейшую очистку реципиентных клеток. Этот прием оказался успешным при клонировании генов, кодирующих клеточные поверхностные антигены. В данном случае для обогащения использовали антитела, а для разделения субпопуляций клеток флуоресцентный сортер.
В реципиентных клетках ДНК плазмиды, содержащей селективный маркер, лигируется с донорной геномной ДНК. Это приводит к «маркированию» последовательности ДНК клетки млекопитающего и может упростить выделение донорного гена после нескольких повторных трансфекции.
В опытах по котрансфекции мы использовали смесь из 1 мкг плазмидной и 20 мкг геномной ДНК. Смесь готовили непосредственно перед добавлением хлорида кальция.
Прочие статьи:
Термодинамический анализ основной реакции. Исходные данные
Уравнение реакции: С2Н5ОН + О2 СН3СООН + Н2О
Температурный интервал 10 ÷ 60ºC (283 ÷ 333 К)
Шаг изменения температуры 10ºC
Таблица 5. Исходные данные
В-во
ni
,
кДж/моль
,
Дж/(моль*К)
А0
А1 ...
Этапы расообразования
Расообразовательный процесс может быть дискретен не только в географическом отношении, но и во временнóм аспекте. Теоретически такая временнáя дискретность весьма вероятна из-за известных и достаточно частых исторических соб ...
Моногеноидозы
· Гиродактилеза карпов
Возбудителями гиродактилеза карпов чаще всего являются плоские черви Gyrodactylus elegans и G. Medius длиной 0.6-1 мм и шириной 0,12—0.15 мм. Тело паразита, способное сокращаться, суживается к обоим концам, особенн ...