Известно, что компетентные клетки способны включать большое количество донорной ДНК, причем одна реципиентная клетка может включать несколько разных молекул донорной ДНК в один геномный сайт. Этот феномен позволяет выделять компетентные субпопуляции из общей массы реципиентных клеток и маркировать геном млекопитающих. Если донорная ДНК смешана с плазмидной, кодирующей селективный для клеток млекопитающих маркер, селекция по плазмидному гену после трансфекции позволяет выделить популяцию трансфицированных клеток. Такое обогащение облегчает дальнейшую очистку реципиентных клеток. Этот прием оказался успешным при клонировании генов, кодирующих клеточные поверхностные антигены. В данном случае для обогащения использовали антитела, а для разделения субпопуляций клеток флуоресцентный сортер.
В реципиентных клетках ДНК плазмиды, содержащей селективный маркер, лигируется с донорной геномной ДНК. Это приводит к «маркированию» последовательности ДНК клетки млекопитающего и может упростить выделение донорного гена после нескольких повторных трансфекции.
В опытах по котрансфекции мы использовали смесь из 1 мкг плазмидной и 20 мкг геномной ДНК. Смесь готовили непосредственно перед добавлением хлорида кальция.
Прочие статьи:
Александр Флеминг
Шотландский бактериолог Александер Флеминг родился 6 августа 1881 года в графстве Эйршир в семье фермера Хью Флеминга и его второй жены Грейс (Мортон) Флеминг.
Когда мальчику исполнилось семь лет, умер отец, и матери пришлось самой управ ...
Нарушение симметрии в ходе биологической
и социально-экономической эволюции
Древний математический метод Фибоначчи и физическая модель статистического равновесия объединены нами в единую теорию статистической симметрии. Это оказалось возможным за счет построения модели равновесия на основе постулата о равенстве м ...
Средства индивидуальной защиты
Средствами индивидуальной защиты в лесу при нападении диких зверей и для обеспечения безопасности во время проведения рейдов является: холодное и огнестрельное оружие.
Также при химическом и бактериологическом заражении местности, к сред ...