Известно, что компетентные клетки способны включать большое количество донорной ДНК, причем одна реципиентная клетка может включать несколько разных молекул донорной ДНК в один геномный сайт. Этот феномен позволяет выделять компетентные субпопуляции из общей массы реципиентных клеток и маркировать геном млекопитающих. Если донорная ДНК смешана с плазмидной, кодирующей селективный для клеток млекопитающих маркер, селекция по плазмидному гену после трансфекции позволяет выделить популяцию трансфицированных клеток. Такое обогащение облегчает дальнейшую очистку реципиентных клеток. Этот прием оказался успешным при клонировании генов, кодирующих клеточные поверхностные антигены. В данном случае для обогащения использовали антитела, а для разделения субпопуляций клеток флуоресцентный сортер.
В реципиентных клетках ДНК плазмиды, содержащей селективный маркер, лигируется с донорной геномной ДНК. Это приводит к «маркированию» последовательности ДНК клетки млекопитающего и может упростить выделение донорного гена после нескольких повторных трансфекции.
В опытах по котрансфекции мы использовали смесь из 1 мкг плазмидной и 20 мкг геномной ДНК. Смесь готовили непосредственно перед добавлением хлорида кальция.
Прочие статьи:
Факторы, влияющие на численность
Песец - один из ценных видов пушных зверей. По размерам песцового промысла Россия занимает первое место в мире. В дореволюционное время в России добывали десятки тысяч песцов и около ¾ части добычи распродавали на промышленных ярма ...
Вегетативная нервная система
Важную роль в приспособлении организма к условиям среды выполняет также вегетативная нервная и тема. Вегетативная нервная система-отдел нервной системы, регулирующий функции всех органов, сердечнососудистой системы, обмен веществ. Вегетат ...
Мероприятия по охране и воспроизводству охотничьих животных и рыбных
запасов
Таблица 5
№
Показатели
Единица измерения
Фактически
1.
Заготовка кормов для подкормки дичи:
Сено
Тонн
0,5
Желуди
Тонн
Зерно
Тонн
34,5
Комбикорм
Тонн ...