Для приготовления двухцепочечных образцов, используемых при секвенировании, выберите одну из двух методик.
1. Денатурируйте образец NaOH, перенесите в лед, нейтрализуйте реакцию, после чего быстро осадите ДНК- Растворите ДНК в буфере, содержащем секвенационный праймер, при необходимой температуре отжига.
2. Денатурируйте образец нагреванием, затем быстро перенесите в спиртовую баню, охлажденную до температуры сухого льда, замедлив таким образом процесс реассоциации цепей. Добавьте секвенационный праймер и нагрейте до необходимой температуры отжига.
Для секвенирования двухцепочечных плазмидных ДНК подходят оба способа. Секвенировать продукты ПЦР по этим инструкциям гораздо труднее, так как короткие линейные фрагменты ДНК более склонны к реассоциации, чем двухцепочечные кольцевые плазмиды.
Прочие статьи:
СЕМЕЙСТВО Волнянки Lymantriidae.
Семейство крупных или средней величины бабочек (размах крыльев 25—70 мм). выражен половой диморфизм - самки крупнее, менее подвижны. Тело волосистое, крылья относительно широкие (у самок некоторых видов недоразвитые), чаще с преобладанием ...
Развитие естествознания от античности до наших дней.
Естественнонаучные знания Древнего Востока проникли в Древнюю Грецию в VI в. до н.э. и обрели статус науки как определенной системы знаний. Эта наука называлась натурфилософией (от лат. natura — природа). Натурфилософы были одновременно и ...
Об основах теории интегративно-структурных слоев материи
19 ноября 2010 г. Великому
русскому ученому, философу и
поэту М.В.Ломоносову
исполняется 299 лет
со дня рождения.
Эта работа построена на идеях русского мыслителя и ученого Михаила Васильевича Ломоносова, о котором сегодня столь мало ...