Для приготовления двухцепочечных образцов, используемых при секвенировании, выберите одну из двух методик.
1. Денатурируйте образец NaOH, перенесите в лед, нейтрализуйте реакцию, после чего быстро осадите ДНК- Растворите ДНК в буфере, содержащем секвенационный праймер, при необходимой температуре отжига.
2. Денатурируйте образец нагреванием, затем быстро перенесите в спиртовую баню, охлажденную до температуры сухого льда, замедлив таким образом процесс реассоциации цепей. Добавьте секвенационный праймер и нагрейте до необходимой температуры отжига.
Для секвенирования двухцепочечных плазмидных ДНК подходят оба способа. Секвенировать продукты ПЦР по этим инструкциям гораздо труднее, так как короткие линейные фрагменты ДНК более склонны к реассоциации, чем двухцепочечные кольцевые плазмиды.
Прочие статьи:
Высшая нервная деятельность
Деятельность коры больших Полушарий, как и других отделов нервной системы, имеет рефлекторный характер. Основы, учения о рефлекторной деятельности мозга были заложены русским физиологом и.м. Сеченовым в труде «Рефлексы головного мозга». Д ...
Научная революция XVI-XVII
вв. и становление классической науки
Отправной точкой научной революции, в результате которой появилась классическая наука и современное естествознание, стал выход книги Николая Коперника "О вращении небесных сфер" в 1543 г. Но гелиоцентрические идеи, высказанные т ...
Философские проблемы эволюционной теории.
Основной
философской проблемой эволюционной теории
является проблема антропосоциогенеза.
Существует большое количество подходов к пониманию этой проблемы. Всех исследователей – философов этой проблемы можно условно разделить на три группы ...