Для приготовления двухцепочечных образцов, используемых при секвенировании, выберите одну из двух методик.
1. Денатурируйте образец NaOH, перенесите в лед, нейтрализуйте реакцию, после чего быстро осадите ДНК- Растворите ДНК в буфере, содержащем секвенационный праймер, при необходимой температуре отжига.
2. Денатурируйте образец нагреванием, затем быстро перенесите в спиртовую баню, охлажденную до температуры сухого льда, замедлив таким образом процесс реассоциации цепей. Добавьте секвенационный праймер и нагрейте до необходимой температуры отжига.
Для секвенирования двухцепочечных плазмидных ДНК подходят оба способа. Секвенировать продукты ПЦР по этим инструкциям гораздо труднее, так как короткие линейные фрагменты ДНК более склонны к реассоциации, чем двухцепочечные кольцевые плазмиды.
Прочие статьи:
Перспективные направления развития лазерных
технологий
Лазерные технологии по многообразию применений едва ли уступают охватившей в той или иной степени все основные сферы человеческой деятельности микроэлектронной технологии. Уникальная способность лазеров концентрировать световую энергию в ...
Структура вселенной
Систем самого высокого порядка – Метагалактика
– это доступное наблюдение части Вселенной, она представляет собой систему взаимодействия скоплений галактик, она имеет сетчатую («ячеистую») структуру, т.е. галактики расположены неравномер ...
Чернильная бомба
В минуту крайней опасности головоногие выбрасывают из своего тела струю черной жидкости. Чернила сначала «висят» в воде в виде темной и компактной капли, по форме напоминающей очертания выбросившего ее животного. И хищник вместо убегающей ...