Для приготовления двухцепочечных образцов, используемых при секвенировании, выберите одну из двух методик.
1. Денатурируйте образец NaOH, перенесите в лед, нейтрализуйте реакцию, после чего быстро осадите ДНК- Растворите ДНК в буфере, содержащем секвенационный праймер, при необходимой температуре отжига.
2. Денатурируйте образец нагреванием, затем быстро перенесите в спиртовую баню, охлажденную до температуры сухого льда, замедлив таким образом процесс реассоциации цепей. Добавьте секвенационный праймер и нагрейте до необходимой температуры отжига.
Для секвенирования двухцепочечных плазмидных ДНК подходят оба способа. Секвенировать продукты ПЦР по этим инструкциям гораздо труднее, так как короткие линейные фрагменты ДНК более склонны к реассоциации, чем двухцепочечные кольцевые плазмиды.
Прочие статьи:
Характеристика Астраханской области
Астраханская область расположена на юго-востоке Восточно-Европейской равнины, занимает Волго-Ахтубинскую пойму, дельту реки Волги и прилегающие к ним полупустыни Прикаспийской низменности, омывается Каспийским морем. Граничит на юго-запад ...
Характеристика чрезвычайных ситуаций природного происхождения.
Общая характеристика чрезвычайных ситуаций природного происхождения
ЧС природного характера делятся на: геологические, метеорологические, гидрологические, природные пожары, биологические и космические.
Говоря о природных ЧС, следует подчеркнуть роль антропогенного влияния на их проявление. Известны много ...
Научная несостоятельность расистских теорий
Следует обратить внимание на полное несоответствие этой «теории» картине распространения индоевропейских народов. Исчисляющееся многими десятками миллионов темноволосое и темноглазое население Южной Европы, исключая небольшой народ – баск ...