Секвестрование двухцепочечных образцов

Статьи » Полимеразная цепная реакция » Секвестрование двухцепочечных образцов

Для приготовления двухцепочечных образцов, используемых при секвенировании, выберите одну из двух методик.

1. Денатурируйте образец NaOH, перенесите в лед, нейтрализуйте реакцию, после чего быстро осадите ДНК- Растворите ДНК в буфере, содержащем секвенационный праймер, при необходимой температуре отжига.

2. Денатурируйте образец нагреванием, затем быстро перенесите в спиртовую баню, охлажденную до температуры сухого льда, замедлив таким образом процесс реассоциации цепей. Добавьте секвенационный праймер и нагрейте до необходимой температуры отжига.

Для секвенирования двухцепочечных плазмидных ДНК подходят оба способа. Секвенировать продукты ПЦР по этим инструкциям гораздо труднее, так как короткие линейные фрагменты ДНК более склонны к реассоциации, чем двухцепочечные кольцевые плазмиды.


Прочие статьи:

Гнезда птиц
А – кладка на земле без гнезда у козодоя и Б – кулика зуйка; В – гнездо на земле рябчика и Г – обыкновенной чайки; Д – яйцо кайры на голой скале; Е – гнездо моевки на скалистом уступе; Ж – императорский пингвин с яйцом на лапах; ...

Формирование Солнечной системы. Возникновение Земли. Происхождение Солнечной системы
Солнечная система состоит из центрального небесного тела – звезды Солнца, 8 больших планет, обращающихся вокруг него, их спутников, множества малых планет – астероидов, многочисленных комет и межпланетной среды. Большие планеты располагаю ...

Тепловой баланс стадии синтеза. Исходные данные
Таблица 9. - Исходные данные В-во ni , кДж/моль , Дж/(моль*К) А0 А1 А2 А3 А-2 СН3СООН 1 -431,8 282,4 -11,2 310,8 -244,7 78,4 0,42 Н2О 1 -241,8 188,7 30,2 6,7 ...

Разделы