Для приготовления двухцепочечных образцов, используемых при секвенировании, выберите одну из двух методик.
1. Денатурируйте образец NaOH, перенесите в лед, нейтрализуйте реакцию, после чего быстро осадите ДНК- Растворите ДНК в буфере, содержащем секвенационный праймер, при необходимой температуре отжига.
2. Денатурируйте образец нагреванием, затем быстро перенесите в спиртовую баню, охлажденную до температуры сухого льда, замедлив таким образом процесс реассоциации цепей. Добавьте секвенационный праймер и нагрейте до необходимой температуры отжига.
Для секвенирования двухцепочечных плазмидных ДНК подходят оба способа. Секвенировать продукты ПЦР по этим инструкциям гораздо труднее, так как короткие линейные фрагменты ДНК более склонны к реассоциации, чем двухцепочечные кольцевые плазмиды.
Прочие статьи:
Транспортировка икры, личинок, молоди и взрослых особей белуги
Интенсификация рыбоводства, расширение видового разнообразия аквакультуры, трансформация технологического процесса выращивания обусловливают необходимость совершенствования средств и методов транспортирования рыб определенных видов и возр ...
Царство растений. Покрытосеменные или цветковые растения
Особенность –
наличие цветков и покрытосемянность. 390 семейств цветковых составляют два класса: Двудольные и Однодольные.
Все многообразие форм цветковых растений может быть сведено к двум основным типам: древесному (деревья и кустарни ...
Места обитания
Касатка - космополит: живет во всех океанах от Арктики до Антарктики, где далеко заходит в плавучие льды. В тропиках встречается реже, чем в холодных и умеренных водах. Здесь она концентрируется вблизи тюленьих и котиковых лежбищ, близ мо ...