Для приготовления двухцепочечных образцов, используемых при секвенировании, выберите одну из двух методик.
1. Денатурируйте образец NaOH, перенесите в лед, нейтрализуйте реакцию, после чего быстро осадите ДНК- Растворите ДНК в буфере, содержащем секвенационный праймер, при необходимой температуре отжига.
2. Денатурируйте образец нагреванием, затем быстро перенесите в спиртовую баню, охлажденную до температуры сухого льда, замедлив таким образом процесс реассоциации цепей. Добавьте секвенационный праймер и нагрейте до необходимой температуры отжига.
Для секвенирования двухцепочечных плазмидных ДНК подходят оба способа. Секвенировать продукты ПЦР по этим инструкциям гораздо труднее, так как короткие линейные фрагменты ДНК более склонны к реассоциации, чем двухцепочечные кольцевые плазмиды.
Прочие статьи:
Биология касатки. Зубы
Зубы массивные, по 10-13 пар вверху и внизу, уплощены спереди назад; в поперечном сечении их корни четырехугольные. Толщина наибольших зубов по большему диаметру 30-50 мм, высота от 12 до 14 см. Зубы сидят исключительно прочно в расширенн ...
Концепция необратимости и термодинамики. Понятие времени в классической термодинамике.
Классическую термодинамику Клаузиуса издавна называют королевой наук. Это замечательная научная система, детали которой ни по красоте, ни по блестящей законченности не уступают всей системе в целом. Последние слова принадлежат М. Планку. ...
Интеграция естественно - научной и гуманитарной культур
Гуманитарные и естественные науки, а также формирующиеся на их основе типы культур разделены, но вместе с тем они нуждаются друг в друге и они не столько противоположны, сколько взаимодополнительны. Такое неразрывное единство двух культур ...