Для приготовления двухцепочечных образцов, используемых при секвенировании, выберите одну из двух методик.
1. Денатурируйте образец NaOH, перенесите в лед, нейтрализуйте реакцию, после чего быстро осадите ДНК- Растворите ДНК в буфере, содержащем секвенационный праймер, при необходимой температуре отжига.
2. Денатурируйте образец нагреванием, затем быстро перенесите в спиртовую баню, охлажденную до температуры сухого льда, замедлив таким образом процесс реассоциации цепей. Добавьте секвенационный праймер и нагрейте до необходимой температуры отжига.
Для секвенирования двухцепочечных плазмидных ДНК подходят оба способа. Секвенировать продукты ПЦР по этим инструкциям гораздо труднее, так как короткие линейные фрагменты ДНК более склонны к реассоциации, чем двухцепочечные кольцевые плазмиды.
Прочие статьи:
Пример с сегрегационного анализа, проводимого с
помощью метода геномных отпечатков
Ниже приводится пример анализа наследования полос в геномных отпечатках отдельной широкой сибсовой ветви.
Из-за несовершенства агарозного геля при электрофорезе лучше ие использовать для считывания данных отпечатков компьютерную технику, ...
Химические процессы, реакционная способность веществ
Законы показывают переходы теплоты в работу. Изобретение паровых машин подтолкнуло развитие термодинамики. В 1848 году Джоуль впервые рассчитал эквивалент теплоты и работы 1 кал=4,187 Дж.
Термодинамическая система – это система, состояща ...
Царство растений. Общая характеристика
Царство растений включает более 500 тысяч видов.
– растения способны к фотосинтезу;
– клетки растений покрыты плотной целлюлозной оболочкой;
– у растений наблюдается высокая расчлененность тела;
– существуют некоторые ограниченные дви ...