Приложение 4. Инструкция по применению набора иммунофлюоресцентного для выявления возбудителя болезни Лайма в переносчиках
МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ
ГУ «НИИ ЭПИДЕМИОЛОГИИ И МИКРОБИОЛОГИИ»
220114, г. Минск, ул. Филимонова, 23, тел. 226-56-75
УТВЕРЖДЕНА МЗ РБ
26 июня 2003 г.
№ гос. рег. МН-7.3519-0204
ИНСТРУКЦИЯ ПО ПРИМЕНЕНИЮ
набора иммунофлюоресцентного для выявления
возбудителя болезни Лайма в переносчиках
Набор представляет собой комплект, основным компонентом которого является иммунная сыворотка, содержащая антитела к возбудителю болезни Лайма (БЛ).
Основное свойство набора – способность выявлять возбудителя БЛ в переносчиках за счёт специфического взаимодействия антител иммунной сыворотки с антигеном возбудителя. Комплекс антиген-антитело выявляют с помощью антивидовой сыворотки, меченой флюоресцеинизотиоционатом (ФИТЦ), дающей чётко выраженное изумрудно-зелёное свечение микробных клеток возбудителя при люминисцентном микроскопировании. Все компоненты набора являются неинфекционными.
1. НАЗНАЧЕНИЕ
Набор предназначен для выявления антигена – возбудителя БЛ (Borrelia burgdorferi sensu lato) в переносчиках методом, базирующемся на реакции непрямой иммунофлюоресценции (РНИФ).
Основными переносчиками возбудителя Лайм-боррелиоза являются иксодовые клещи - I. ricinus, реже боррелии обнаруживаются в клещах D. reticulatus. Могут быть исследованы случайные переносчики – другие кровососущие членистоногие приподозрении на вероятность наличия у них возбудителя БЛ.
Исследованию подлежат живые особи любой стадии развития (голодные и напитавшиеся), а также погибшие (без признаков плесени), высохшие переносчики (после их размачивания в цитратно-фосфатном буферном растворе (ЦФБ) при 4-6°С в течение 12-24 часов). Могут быть исследованы фрагменты клеща (часть брюшка).
2. СОСТАВ НАБОРА
2.1. Иммунная сыворотка, готова к использованию, 1,5 мл – 1 пр-ка
2.2. (К+)-антиген возбудит. БЛ, готов к использов., 0,2 мл – 1 пр-ка
2.3. Конъюгат, готов к использованию, 1,5 мл – 1 пр-ка
2.4. Концентрат ЦФБ, 25х, 20 мл – 4 фл.
2.5. Предметные стёкла с лунками, – 3 шт.
2.6. Предметные стёкла без лунок, – 1 шт.
3. ПРИГОТОВЛЕНИ ЦФБ, РАЗЛИВ И ХРАНЕНИЕ КОМПОНЕНТОВ
3.1. Приготовление ЦФБ (цитратно-фосфатного буферного раствора), рН 7,2-7,4: содержимое 1 флакона (п. 2.4.) разводят дистиллированной водой до объёма 500 мл. (Если во флаконе с концентратом ЦФБ образовались кристаллы солей, их предварительно растворяют, помещая флакон в тёплую воду.) проверяют и в случае необходимости коррегируют рН. Применяется для приготовления суспензий из переносчиков, отмывки предметных стёкол. Хранение при 4-6°С до 1 недели.
3.2. Иммунную сыворотку (п.2.1.) разливают на несколько порций из расчёта 10 мкл (0.01 мл) на лунку и хранят до использования при -20°С. Размороженный реагент может храниться при 4-6°С в течение 72 часов.
3.3. К+ (п. 2.2.) разливают порциями по 20 мкл (0.02 мл) и хранят до использования при -20°С. Размороженный реагент может храниться при 4-6°С в течение 72 часов.
3.4. Конъюгат (антивидовые иммуноглобулины, меченые ФИТЦ) с раствором Эванса голубого (п. 2.3.) разливают на несколько порций из расчёта 10 мкл (0,01 мл) на лунку и хранят до использования при -20°С. Размороженный реагент может храниться при 4-6°С 72 часа.
4. ПРОВЕДЕНИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ПЕРЕНОСЧИКОВ
4.1. Подготовка к исследованию.
4.1.1. Чистые предметные стёкла с лунками и без лунок ополаскиваются дистиллированной водой и досуха протирают марлевой салфеткой.
4.1.2. Иммунную сыворотку (п.2.1.), К+ (п. 2.2.) и конъюгат (п. 2.3.) размораживают при комнатной температуре. Готовы к применению.
4.1.3. На предметное стекло без лунок наносится капля ЦФБ объёмом 10-20 мкл (0,01- 0,02 мл) в зависимости от размера переносчика. При исследовании сильно напитавшихся самок клещей объём капли может быть увеличен до 50 мкл (0,05 мл). исследуемого членистоногого помещают в каплю брюшком кверху и0, придерживая глазным пинцетом, либо другим инструментом, иссекают его тело препаровальной иглой.
4.2. Постановка РНИФ.
4.2.1. В лунку предметного стекла переносят жидкую фракцию приготовленной суспензии (10-20 мкл), не допуская попадания крупных частиц.
4.2.2. В одну или две свободные лунки предметного стекла вносят по 10 мкл (0,01 мл) антигена возбудителя БЛ (К+).
4.2.3. препарат высушивают при комнатной температуре или в термостате (при 37°С), ополаскивают дистиллированной водой и снова высушивают.
Прочие статьи:
Укоренение черенка в воде
Это метод укоренения черенков сенполий дает возможность наблюдать и контролировать процесс появления корней, но время укоренения увеличивается за счет двойной адаптации черенка к условиям прорастания (сначала к водной среде, а затем к пес ...
Биология енотовидной собаки. Систематическое
положение
Тип хордовые (Ordes). Класс млекопитающие (Class Mammalian). Отряд хищные (Ordo Carnivora). Семейство собачьи (Familia Canidae). Род енотовидные собаки (Genus Nycnereutes). Вид енотовидная собака (Nyctereutes Procyonoides) (Соколов В.Е., ...
Этнический и антропологический состав европейской части СНГ
«Этнический состав. Самый многочисленный народ СНГ – русские (130 млн.), широко расселены по всей территории. По происхождению, языку и культуре им родственны украинцы (40,8 млн.) и белорусы (9,2 млн.). Русские, украинцы и белорусы состав ...