CSPA является основным белком холодового шока E. coli, его синтез значительно возрастает в ответ на холодовой шок. Аминокислотная последовательность CSPA имеет 43% идентичности «домену холодового шока» эукариотического Y-box семе ства белков, члены которого взаимодействуют с РНК и ДНК для регуляции их функций. Показано, что CSPA кооперативно связывается с денатурировавшими под действием низко температуры одноцепочечными РНК, размером больше, чем 74 основания. Для его кооперативного связывания необходима минимальная концентрация CSPA 2.7х10-5 М, что значительно ниже, чем присутствующая в клетке после холодового шока концентрация CSPA. Для связывания CSPA не было установлено специфических последовательностей РНК, что показывает, что он может связываться с широким спектром последовательностей. Когда состоящий из 142 оснований 5'-нетранслируемый участок собственной мРНК CSPA был использован как субстрат для рибонуклеаз А и Т1, добавление CSPA значительно стимулировало гидролиз РНК путем предотвращения образования РНКазоустойчивых связей из-за образования стабильных вторичных структур в 5'-нетранслируемом участке. Эти данные показывают, что связывание CSPA с РНК дестабилизирует вторичную структуру РНК и делает ее доступно для рибонуклеаз. Предполагается, что CSPA действует как шаперон РНК для предотвращения образования вторично структуры у РНК при низких температурах. Эта функция CSPA может быть необходима для эффективно трансляции мРНК при низких температурах и, по-видимому, может также оказывать влияние на процесс транскрипции.
При падении температуры в клетках Escherichia coli обнаружена сильная индукция синтеза важнейшего белка холодового шока – CSPA. Поскольку этот белок весьма консервативен, был использован подход, основанный на PCR с использованием пары дегенерированных праймеров, полученных из высоко консервативных областей cspA-связанных белков, чтобы доказать присутствие как минимум трех связанных с cspA генов в Lactacoccus lactis. Один из них, cspB, был клонирован и секвенирован. Он кодирует белок из 66 аминокислот, который обладает 60% тождественности последовательности с CSPA из Escherichia coli. После холодового шока уровень транскриптов мРНК CspB увеличивался, что было показано при помощи нозерн-блот гибридизации. Кроме того, наблюдалась индукция активности CSPB-зависимой бета-галактозидазы. Эти результаты указывают на то, что ген cspB из L. Lactis индуцируется холодовым шоком.
Белок холодового шока Bacillus subtilis, CSPB, после гипотермии влияет на уровень содержания нескольких других белков холодового шока в B. Subtilis. Экспрессия CSPB в Escherichia coli при 370C – в условиях, когда белки холодового шока CSPA и CSPB E. Coli не обнаруживаются – приводит к заметному снижению скорости роста клеток и имеет значительное влияние на уровень синтеза других белков. При этом происходит как уменьшение, так и увеличение уровне синтеза специфических белков. В частности, индукция CSPB приводит к усилению активности бета-галактозидазы, экспрессированной из слитых транскриптов hns-lacz. Это увеличение отражает индукцию транскрипции hns и синтеза HNS после холодового шока и in vitro зависит от присутствия CSPA. Напротив, экспрессия мутантной формы CSPB, которая неспособна связываться с суперскрученной ДНК in vitro, не имела влияния на степени увеличения экспрессии генов, уровня синтеза белка или активность бета-галактозидазы. Эти данные демонстрируют сильное влияние CSPB на синтез белка в E. Coli и предполагают аналогичную функцию для CSPA в E. Coli по сравнению с CSPB в B. Subtilis. Однако впоследствии было установлено, что CSPA и CSPB по-разному связываются с одноцепочечной ДНК. В частности, в ходе этих исследований было установлено, что, если CSPB связывает поли-Т олигонуклеотиды примерно на порядок сильнее, чем поли-U или поли-С одноцепочечные ssДНК, тогда как CSPA связывает поли-Т, поли-U и поли-С ssДНК с одинаковой интенсивностью.
Прочие статьи:
Регуляция висцеральных функций
Эта функция осуществляется преимущественно через деятельность гипоталамуса, который является диэнцефалическим звеном лимбической системы. О тесных эфферентных связях системы с внутренними органами свидетельствуют разнообразные изменения и ...
Развитие пятого мозгового пузыря (Myelencephalon)
Myelencephalon (пятый мозговой пузырь, или заможье) представляет собой непосредственное продолжение спинномозговой закладки в собственно головной мозг.Каудально он ограничивается первым спинномозговым нервом, краниально- краем области мос ...
Генетичеcкий механизм поддеpжания
детеpминиpованного cоcтояния
Одна из важнейших общебиологичеcких пpоблем, pешить котоpую помогут cтволовые клетки, – генетичеcкий механизм поддеpжания детеpминиpованного cоcтояния в ходе деления клеток и выхода их в диффеpенциpовку. Вcеpьез ее поcтавил еще Э. Хадоpн ...