Получение дейтерий-меченных аминокислот и их масс-спектрометрический анализ
.
Данные по росту штамма B. methylicum и максимальному уровню накопления фенилаланина в культуральной жидкости на средах с 2 об.% СН3ОН (СD3OD), содержащих ступенчато увеличивающиеся концентрации D2O представлены в таблице 1. Как видно из данных таблицы, рост исследуемых бактерий на средах с возрастающими концентрациями тяжелой воды сопровождался изменением выходов биомассы, времени клеточной генерации и продолжительности лаг-фазы при сохранении способности синтезировать и накапливать фенилаланин в культуральной жидкости. Поэтому было необходимо изучить, как изменяются степени включения дейтерия в фенилаланин и аминокислотные остатки суммарных белков биомассы B. methylicum в этих условиях.
ТАБЛИЦА 1.
Влияние изотопного состава среды на рост штамма B. methylicum и уровень накопления L-фенилаланина в культуральной жидкости.
|
Номер Компоненты среды, об% Величина Выход Время ген. опыта лаг-фазы биомассы часы секреции Н2О 2Н2О СН3ОН С2Н3О2Н часы % L-Phe, | ||||||||
|
1 |
98 |
0 |
2 |
0 |
24,0 |
100 |
2,2 |
100 |
|
2 |
98 |
0 |
0 |
2 |
30,3 |
92,3 |
2,4 |
99,1 |
|
3 |
73,5 |
24,5 |
2 |
0 |
32,1 |
90,6 |
2,4 |
96,3 |
|
4 |
73,5 |
24,5 |
0 |
2 |
34,7 |
85,9 |
2,6 |
97,1 |
|
5 |
49,0 |
49,0 |
2 |
0 |
40,5 |
70,1 |
3,0 |
98,0 |
|
6 |
49,0 |
49,0 |
0 |
2 |
44,2 |
60,5 |
3,2 |
98,8 |
|
7 |
24,5 |
73,5 |
2 |
0 |
45,8 |
56,4 |
3,5 |
90,4 |
|
8 |
24,5 |
73,5 |
0 |
2 |
49,0 |
47,2 |
3,8 |
87,6 |
|
9 |
0 |
98,0 |
2 |
0 |
60,5 |
32,9 |
4,4 |
79,5 |
|
10 |
0 |
98,0 |
0 |
2 |
64,4 |
30,1 |
4,9 |
71,5 |
Для определения степени включения дейтерия в аминокислоты методом масс-спектрометрии электронного удара использовали метиловые эфиры дансил-аминокислот, которые химически стабильны и дают интенсивные пики молекулярных ионов в масс спектрах [13]. В качестве примера на рис.1 показана фрагментация метилового эфира дансилфенилаланина при электронном ударе. В масс-спектрах этого производного, как правило, четко детектируется пик молекулярного иона метилового эфира дансилфенилаланина М+. с m/z 412. Пик аминного фрагмента А имеет невысокую интенсивность, а пик аминоацильного фрагмента В крайне низкую или вообще отсутствует (см. рис. 1). Интенсивности пиков аминных А и аминоацильных В фрагментов других производных аминокислот, например присутствующих в культуральной жидкости аланина, валина и лейцина (изолейцина) при электронном ударе также сопоставимы. Кроме вышеобозначенных пиков, в масс-спектрах электронного удара метиловых эфиров дансил-аминокислот фиксируются пики с m/z 250, 234, 170, которые соответствуют дансильному фрагменту и продуктам его распада до N-диметиламинонафталина.
Прочие статьи:
Предпосылки эволюционной идеи
Жизнь на Земле… Богатство ее форм поразительно! Всегда ли формы жизни были такими, какими мы их наблюдаем сегодня, или в течение многих тысячелетий они прошли длинный путь развития? С древних времен люди по-разному отвечали на этот вопрос ...
Вес плодового тела у крупных экземпляров может достигать 20 кг. В
Великобритании, например, в настоящее время на территории микологического
института (г. Эдем) растёт трутовик диаметром около 4 м. С
Самые большие: гриб-дождевик Galvatia gigantea, обхватом 194,3 см найден в 1985 г. в Висконсине (США), в Вашингтоне (США) в 1946 г. обнаружили трутовик Oxyporus (Fomes) nobilissimus размером 142х94 см, массой около 136 кг.
Самые ядовитые ...
Лишайники
Лишайники представляют собой своеобразную группу комплексных организмов, тело которых состоит из двух компонентов - гриба и водоросли. Как организмы, лишайники были известны задолго до открытия их сущности, Еще великий Теофраст, "оте ...