Получение дейтерий-меченных аминокислот и их масс-спектрометрический анализ
.
Данные по росту штамма B. methylicum и максимальному уровню накопления фенилаланина в культуральной жидкости на средах с 2 об.% СН3ОН (СD3OD), содержащих ступенчато увеличивающиеся концентрации D2O представлены в таблице 1. Как видно из данных таблицы, рост исследуемых бактерий на средах с возрастающими концентрациями тяжелой воды сопровождался изменением выходов биомассы, времени клеточной генерации и продолжительности лаг-фазы при сохранении способности синтезировать и накапливать фенилаланин в культуральной жидкости. Поэтому было необходимо изучить, как изменяются степени включения дейтерия в фенилаланин и аминокислотные остатки суммарных белков биомассы B. methylicum в этих условиях.
ТАБЛИЦА 1.
Влияние изотопного состава среды на рост штамма B. methylicum и уровень накопления L-фенилаланина в культуральной жидкости.
|
Номер Компоненты среды, об% Величина Выход Время ген. опыта лаг-фазы биомассы часы секреции Н2О 2Н2О СН3ОН С2Н3О2Н часы % L-Phe, | ||||||||
|
1 |
98 |
0 |
2 |
0 |
24,0 |
100 |
2,2 |
100 |
|
2 |
98 |
0 |
0 |
2 |
30,3 |
92,3 |
2,4 |
99,1 |
|
3 |
73,5 |
24,5 |
2 |
0 |
32,1 |
90,6 |
2,4 |
96,3 |
|
4 |
73,5 |
24,5 |
0 |
2 |
34,7 |
85,9 |
2,6 |
97,1 |
|
5 |
49,0 |
49,0 |
2 |
0 |
40,5 |
70,1 |
3,0 |
98,0 |
|
6 |
49,0 |
49,0 |
0 |
2 |
44,2 |
60,5 |
3,2 |
98,8 |
|
7 |
24,5 |
73,5 |
2 |
0 |
45,8 |
56,4 |
3,5 |
90,4 |
|
8 |
24,5 |
73,5 |
0 |
2 |
49,0 |
47,2 |
3,8 |
87,6 |
|
9 |
0 |
98,0 |
2 |
0 |
60,5 |
32,9 |
4,4 |
79,5 |
|
10 |
0 |
98,0 |
0 |
2 |
64,4 |
30,1 |
4,9 |
71,5 |
Для определения степени включения дейтерия в аминокислоты методом масс-спектрометрии электронного удара использовали метиловые эфиры дансил-аминокислот, которые химически стабильны и дают интенсивные пики молекулярных ионов в масс спектрах [13]. В качестве примера на рис.1 показана фрагментация метилового эфира дансилфенилаланина при электронном ударе. В масс-спектрах этого производного, как правило, четко детектируется пик молекулярного иона метилового эфира дансилфенилаланина М+. с m/z 412. Пик аминного фрагмента А имеет невысокую интенсивность, а пик аминоацильного фрагмента В крайне низкую или вообще отсутствует (см. рис. 1). Интенсивности пиков аминных А и аминоацильных В фрагментов других производных аминокислот, например присутствующих в культуральной жидкости аланина, валина и лейцина (изолейцина) при электронном ударе также сопоставимы. Кроме вышеобозначенных пиков, в масс-спектрах электронного удара метиловых эфиров дансил-аминокислот фиксируются пики с m/z 250, 234, 170, которые соответствуют дансильному фрагменту и продуктам его распада до N-диметиламинонафталина.
Прочие статьи:
И все-то у них не так, как у других тварей!
У головоногих есть только голова да «руки-ноги», а туловище отсутствует, поэтому необходимые для жизни органы разместились в голове. В результате все оказалось компактно и на своем месте. У морского «чуда-юда» есть небольшой рот с черным ...
Развитие гипофиза (Hypophysis cerebri)
Как уже ранее, при описании развития первичной ротовой полости, ynоминалось вкратце, придаток мозга (hypophysis cerebri) имеет два отдельных зачатка. Один из них берет начало из эктодермы первичной ротовой полости (карман Ратке) и образуе ...
Экологические теории гоминизации
В предгорьях Гималаев в Индии, Пакистане, Юго-Восточной Африке, Ближнем Востоке и Центральной Европе были найдены останки ископаемой крупной обезьяны – рамапитека, по строению зубов оказавшейся промежуточной между современными человекообр ...