Результаты и обсуждение.
Страница 1

Получение дейтерий-меченных аминокислот и их масс-спектрометрический анализ

.

Данные по росту штамма B. methylicum и максимальному уровню накопления фенилаланина в культуральной жидкости на средах с 2 об.% СН3ОН (СD3OD), содержащих ступенчато увеличивающиеся концентрации D2O представлены в таблице 1. Как видно из данных таблицы, рост исследуемых бактерий на средах с возрастающими концентрациями тяжелой воды сопровождался изменением выходов биомассы, времени клеточной генерации и продолжительности лаг-фазы при сохранении способности синтезировать и накапливать фенилаланин в культуральной жидкости. Поэтому было необходимо изучить, как изменяются степени включения дейтерия в фенилаланин и аминокислотные остатки суммарных белков биомассы B. methylicum в этих условиях.

ТАБЛИЦА 1.

Влияние изотопного состава среды на рост штамма B. methylicum и уровень накопления L-фенилаланина в культуральной жидкости.

Номер Компоненты среды, об% Величина Выход Время ген.

опыта лаг-фазы биомассы часы секреции

Н2О 2Н2О СН3ОН С2Н3О2Н часы % L-Phe,  

1

98

0

2

0

24,0

100

2,2

100

2

98

0

0

2

30,3

92,3

2,4

99,1

3

73,5

24,5

2

0

32,1

90,6

2,4

96,3

4

73,5

24,5

0

2

34,7

85,9

2,6

97,1

5

49,0

49,0

2

0

40,5

70,1

3,0

98,0

6

49,0

49,0

0

2

44,2

60,5

3,2

98,8

7

24,5

73,5

2

0

45,8

56,4

3,5

90,4

8

24,5

73,5

0

2

49,0

47,2

3,8

87,6

9

0

98,0

2

0

60,5

32,9

4,4

79,5

10

0

98,0

0

2

64,4

30,1

4,9

71,5

Для определения степени включения дейтерия в аминокислоты методом масс-спектрометрии электронного удара использовали метиловые эфиры дансил-аминокислот, которые химически стабильны и дают интенсивные пики молекулярных ионов в масс спектрах [13]. В качестве примера на рис.1 показана фрагментация метилового эфира дансилфенилаланина при электронном ударе. В масс-спектрах этого производного, как правило, четко детектируется пик молекулярного иона метилового эфира дансилфенилаланина М+. с m/z 412. Пик аминного фрагмента А имеет невысокую интенсивность, а пик аминоацильного фрагмента В крайне низкую или вообще отсутствует (см. рис. 1). Интенсивности пиков аминных А и аминоацильных В фрагментов других производных аминокислот, например присутствующих в культуральной жидкости аланина, валина и лейцина (изолейцина) при электронном ударе также сопоставимы. Кроме вышеобозначенных пиков, в масс-спектрах электронного удара метиловых эфиров дансил-аминокислот фиксируются пики с m/z 250, 234, 170, которые соответствуют дансильному фрагменту и продуктам его распада до N-диметиламинонафталина.

Страницы: 1 2 3


Прочие статьи:

Теория относительности
Предпосылкой к созданию теории относительности явилось развитие в XIX веке электродинамики. Результатом обобщения и теоретического осмысления экспериментальных фактов и закономерностей в областях электричества и магнетизма стали уравнения ...

Циркодиальные ритмы у беспозвоночных
Клеточные механизмы. Рассматривая ритмическую активность (напримнр, сокращения сердца или локомотацию), мы видели, что существуют два основных механизма генерации ритма: либо имеется клетки – водитель ритма (лейсмейкер), выходные сигналы ...

Филин (Bubo bubo)
Статус: в Беларуси – редкий гнездящийся оседлый вид, его численность здесь оценивается в 400-500 пар, занесён в Красную книгу РБ [42]. Очень характерным для филинов белорусской популяции является гнездование в пойменных черноольшанниках н ...

Разделы