Изменение клонированных сегментов: получение мутантов

Страница 3

При втором подходе, так называемом кассетном мутагенезе, участок клонированной ДНК дикого типа замещают синтетическим дуплексным олигодезоксирибонуклеотидом, содержащим мутантную последовательность. В приведенном примере клонированная вставка встроена в дуплексный вектор типа pBR322. В простейшем случае для вырезания участка, в который мы хотим внести мутацию, используют уникальные рестрикционные сайты, встречающиеся во вставке, но не в векторе. Если такие сайты отсутствуют, приходится прибегать к дополнительным ухищрениям. Дуплексный олигонуклеотид получают путем отжига двух синтетических комплементарных цепей, каждая из которых содержит соответствующую замену основания. Кроме того, эти цепи синтезируют таким образом, чтобы дуплекс, который они образуют, имел соответствующие липкие концы. В отличие от гетеродуплексного метода, при трансфекции и клонировании измененного рекомбинанта геномов дикого типа не образуется. Однако если используют смесь синтетических олигодезоксирибонуклеотидов, содержащих альтернативные основания в мутантных участках, то смесь мутантов сегрегирует после трансфекции и ее можно разделить с помощью последующего клонирования. Такой подход оказывается полезным, если необходимо получить разные мутации в одном эксперименте. Напомним, что синтез таких смешанных олигодезоксирибонуклеотидов осуществляется простым использованием на нужной стадии химического синтеза не одного мононуклеотида, а их смеси.

способ обыграть онлайн казино

Прочие статьи:

Эволюция
Вопрос о происхождении и эволюционных связях Bac. anthracis с другими почвенными спорообразующими бациллами, в том число и с Вас. cereus, остается дискуссионным. Попытки в экспериментальных условиях превратить один вид микробов в другой з ...

Ковалевский Владимир Онуфриевич
Ковалевский Владимир Онуфриевич(1842–1883) - русский палеонтолог родился 12 августа 1842 года в селе Шустянке Витебской губернии. С 1851 г. В.О. Ковалевский учился в частном пансионе В.Ф. Мегина в Петербурге. В марте 1855 года поступил в ...

Охотничьи угодья
На территории Благовещенского района основную кормовую базу представляют дубово-бело-берёзовые, дубово-черно-березовые, чистые насаждения дуба монгольского, березы белой, осины (Рисунок 7,8). Подлесок образован: лещиной, леспедецией, шип ...