Клетка-реципиент—эта та среда, в которой может функционировать рекомбинантная ДНК в виде вектора. Такие клетки называют пермиссивными. К ним предъявляют следующие требования:
· не разрушаются чужеродной ДНК или РНК собственными ферментам;
· срабатывает механизм репликации вектора;
· проявляется выраженная активность промотера и/или терминатора транскрипции р-ДНК;
· отмечается полный сплайсиг м-РНК ;
· наблюдается эффективная трансляция м-РНК;
· нет выраженной активности пептидогидролаз, катализирующих реакций гидролиза экспрессируемых чужеродных белков.
Часто в качестве пермиссивных клеток используют Е. coli, Bacillus subtilis, В. stearothermophilus, В. brevis, Saccharomyces cerevisiae.
Для включения вектора в пермессивные клетки используют различные методы: трансформация, инфекция, микроинъекция.
Клетки, способные адсорбировать и поглощать вектор, называют компетентными. У таких клеток изменены свойства клеточной стенки: снижен поверхностный заряд и повышена чувствительность к осмотическому шоку.
Компетентность клеток можно повысить, используя соли кальциялибо совместно соли кальция, магния, рубидия. Кроме того, применяют глубокое замораживание и оттаивание, а также электропорацию (кратковременное воздействие электрического поля высокой напряженности, которое вызывает разрушение цитоплазматической мембраны с образованием пор).
Прочие статьи:
Социальное поведение антропоидов
Сообщества всех животных, ведущих групповой образ жизни, ни в коем случае не представляют собой случайное объединение особей. Они имеют вполне определенную социальную структуру, которая поддерживается специальными поведенческими механизма ...
Приспособленность птиц к различным средам обитания.
Экология птиц
В классе птиц выделяют 28 отрядов. Основные из них: пингвины, страусы, киви, гагры, поганки, трубконосые, веслоногие, голенастые, гусеобразные, хищные птицы, куринные, журавлеобразные, кулики, голубеобразные, попугаи, совы, длиннокрылые ( ...
Меры по охране растительности
Растения используются в качестве пищевых, кормовых, лекарственных, витаминозных, медоносных, декоративных и являются важным резервом для народного хозяйства.
Виды растений существуют не изолированно. Они связаны множеством нитей с другим ...