Клетка-реципиент—эта та среда, в которой может функционировать рекомбинантная ДНК в виде вектора. Такие клетки называют пермиссивными. К ним предъявляют следующие требования:
· не разрушаются чужеродной ДНК или РНК собственными ферментам;
· срабатывает механизм репликации вектора;
· проявляется выраженная активность промотера и/или терминатора транскрипции р-ДНК;
· отмечается полный сплайсиг м-РНК ;
· наблюдается эффективная трансляция м-РНК;
· нет выраженной активности пептидогидролаз, катализирующих реакций гидролиза экспрессируемых чужеродных белков.
Часто в качестве пермиссивных клеток используют Е. coli, Bacillus subtilis, В. stearothermophilus, В. brevis, Saccharomyces cerevisiae.
Для включения вектора в пермессивные клетки используют различные методы: трансформация, инфекция, микроинъекция.
Клетки, способные адсорбировать и поглощать вектор, называют компетентными. У таких клеток изменены свойства клеточной стенки: снижен поверхностный заряд и повышена чувствительность к осмотическому шоку.
Компетентность клеток можно повысить, используя соли кальциялибо совместно соли кальция, магния, рубидия. Кроме того, применяют глубокое замораживание и оттаивание, а также электропорацию (кратковременное воздействие электрического поля высокой напряженности, которое вызывает разрушение цитоплазматической мембраны с образованием пор).
Прочие статьи:
Двудольные сростнолепестные. семейство пасленовые
Общие признаки. Цветок правильный, с двойным околоцветником. Чашечка состоит из 5 чашелистиков. Венчик из пяти лепестков, срастающихся в нижней части так, что образуется короткая (картофель) или длинная (душистый табак) трубка. Тычинок 5; ...
Мембранные белки как ионные каналы.
Среди интегральных белков плазматической мембраны имеется несколько семейств, выполняющих функции ионных каналов. Некоторые из них являются высокоизбирательными для определенных ионов, их относят к классу селективных (например, для иона н ...
«Примерно равен» – но с избытком или с недостатком?
Согласно гипотезе Бернштейна возникновение потенциала действия представлялось как результат «закорачивания» внешней и внутренней среды клетки, при котором потенциал на мембране падал до нуля. При этом потенциал действия, регистрируемый в ...