Клетка-реципиент—эта та среда, в которой может функционировать рекомбинантная ДНК в виде вектора. Такие клетки называют пермиссивными. К ним предъявляют следующие требования:
· не разрушаются чужеродной ДНК или РНК собственными ферментам;
· срабатывает механизм репликации вектора;
· проявляется выраженная активность промотера и/или терминатора транскрипции р-ДНК;
· отмечается полный сплайсиг м-РНК ;
· наблюдается эффективная трансляция м-РНК;
· нет выраженной активности пептидогидролаз, катализирующих реакций гидролиза экспрессируемых чужеродных белков.
Часто в качестве пермиссивных клеток используют Е. coli, Bacillus subtilis, В. stearothermophilus, В. brevis, Saccharomyces cerevisiae.
Для включения вектора в пермессивные клетки используют различные методы: трансформация, инфекция, микроинъекция.
Клетки, способные адсорбировать и поглощать вектор, называют компетентными. У таких клеток изменены свойства клеточной стенки: снижен поверхностный заряд и повышена чувствительность к осмотическому шоку.
Компетентность клеток можно повысить, используя соли кальциялибо совместно соли кальция, магния, рубидия. Кроме того, применяют глубокое замораживание и оттаивание, а также электропорацию (кратковременное воздействие электрического поля высокой напряженности, которое вызывает разрушение цитоплазматической мембраны с образованием пор).
Прочие статьи:
Строение мышц и биохимия их работы
В связи с разнообразием движения мышцы животных и человека имеют разную форму и строение. Одни при работе могут проявлять большую силу при незначительном напряжении и долго не утомляться, другие отличаются быстротой сокращений, сильно нап ...
Царство растений. Покрытосеменные или цветковые растения
Особенность –
наличие цветков и покрытосемянность. 390 семейств цветковых составляют два класса: Двудольные и Однодольные.
Все многообразие форм цветковых растений может быть сведено к двум основным типам: древесному (деревья и кустарни ...
первое начало термодинамики
Первое начало термодинамики — один из двух основных законов термодинамики, представляет собой закон сохранения энергии для термодинамических систем, в к-рых существ, значение имеют тепловые процессы (поглощение или выделение тепла) [4].
...