Клетка-реципиент—эта та среда, в которой может функционировать рекомбинантная ДНК в виде вектора. Такие клетки называют пермиссивными. К ним предъявляют следующие требования:
· не разрушаются чужеродной ДНК или РНК собственными ферментам;
· срабатывает механизм репликации вектора;
· проявляется выраженная активность промотера и/или терминатора транскрипции р-ДНК;
· отмечается полный сплайсиг м-РНК ;
· наблюдается эффективная трансляция м-РНК;
· нет выраженной активности пептидогидролаз, катализирующих реакций гидролиза экспрессируемых чужеродных белков.
Часто в качестве пермиссивных клеток используют Е. coli, Bacillus subtilis, В. stearothermophilus, В. brevis, Saccharomyces cerevisiae.
Для включения вектора в пермессивные клетки используют различные методы: трансформация, инфекция, микроинъекция.
Клетки, способные адсорбировать и поглощать вектор, называют компетентными. У таких клеток изменены свойства клеточной стенки: снижен поверхностный заряд и повышена чувствительность к осмотическому шоку.
Компетентность клеток можно повысить, используя соли кальциялибо совместно соли кальция, магния, рубидия. Кроме того, применяют глубокое замораживание и оттаивание, а также электропорацию (кратковременное воздействие электрического поля высокой напряженности, которое вызывает разрушение цитоплазматической мембраны с образованием пор).
Прочие статьи:
Темпы массового роста
При исследовании массовой структуры рыб было выявлено, что наибольший прирост наблюдался у трехгодовиков, и составил 30,2 %. (табл.3)
Таблица - 3.Темпы массового роста.
Возраст
M, r
Cp ± mx
Min-max
n
Прирост
гр
% ...
Химические процессы, реакционная способность веществ
Законы показывают переходы теплоты в работу. Изобретение паровых машин подтолкнуло развитие термодинамики. В 1848 году Джоуль впервые рассчитал эквивалент теплоты и работы 1 кал=4,187 Дж.
Термодинамическая система – это система, состояща ...
Антигенная структура
Вас. anthracis изучена еще недостаточно.
Н.Ф. Гамалея (1928) установил, что в подкожном отеке, образующемся на месте введения возбудителя, содержатся ядовитые вещества, вызывающие при введении в кровь быструю гибель кролика. Watson, Bloo ...