Клетка-реципиент—эта та среда, в которой может функционировать рекомбинантная ДНК в виде вектора. Такие клетки называют пермиссивными. К ним предъявляют следующие требования:
· не разрушаются чужеродной ДНК или РНК собственными ферментам;
· срабатывает механизм репликации вектора;
· проявляется выраженная активность промотера и/или терминатора транскрипции р-ДНК;
· отмечается полный сплайсиг м-РНК ;
· наблюдается эффективная трансляция м-РНК;
· нет выраженной активности пептидогидролаз, катализирующих реакций гидролиза экспрессируемых чужеродных белков.
Часто в качестве пермиссивных клеток используют Е. coli, Bacillus subtilis, В. stearothermophilus, В. brevis, Saccharomyces cerevisiae.
Для включения вектора в пермессивные клетки используют различные методы: трансформация, инфекция, микроинъекция.
Клетки, способные адсорбировать и поглощать вектор, называют компетентными. У таких клеток изменены свойства клеточной стенки: снижен поверхностный заряд и повышена чувствительность к осмотическому шоку.
Компетентность клеток можно повысить, используя соли кальциялибо совместно соли кальция, магния, рубидия. Кроме того, применяют глубокое замораживание и оттаивание, а также электропорацию (кратковременное воздействие электрического поля высокой напряженности, которое вызывает разрушение цитоплазматической мембраны с образованием пор).
Прочие статьи:
Размножение и развитие
Азовский пузанок, достигнув половой зрелости к концу первого года жизни, собирается в устьях рек и опресненных лиманах, где с апреля по начало июня происходит нерест. Икрометание проходит в воде с содержанием соли до 2 %, при температуре ...
Выращивание растений при искусственном освещении. Условия наилучшего использования
электрического света.
Исследования показали, что на развитие растений в значительной мере влияет интенсивность и спектральный состав света. В связи с этим большой интерес представляют опыты В.И. Разумова, который доказал, что красный свет действует как естеств ...
Термодинамический анализ основной реакции. Исходные данные
Уравнение реакции: С2Н5ОН + О2 СН3СООН + Н2О
Температурный интервал 10 ÷ 60ºC (283 ÷ 333 К)
Шаг изменения температуры 10ºC
Таблица 5. Исходные данные
В-во
ni
,
кДж/моль
,
Дж/(моль*К)
А0
А1 ...