Клетка-реципиент—эта та среда, в которой может функционировать рекомбинантная ДНК в виде вектора. Такие клетки называют пермиссивными. К ним предъявляют следующие требования:
· не разрушаются чужеродной ДНК или РНК собственными ферментам;
· срабатывает механизм репликации вектора;
· проявляется выраженная активность промотера и/или терминатора транскрипции р-ДНК;
· отмечается полный сплайсиг м-РНК ;
· наблюдается эффективная трансляция м-РНК;
· нет выраженной активности пептидогидролаз, катализирующих реакций гидролиза экспрессируемых чужеродных белков.
Часто в качестве пермиссивных клеток используют Е. coli, Bacillus subtilis, В. stearothermophilus, В. brevis, Saccharomyces cerevisiae.
Для включения вектора в пермессивные клетки используют различные методы: трансформация, инфекция, микроинъекция.
Клетки, способные адсорбировать и поглощать вектор, называют компетентными. У таких клеток изменены свойства клеточной стенки: снижен поверхностный заряд и повышена чувствительность к осмотическому шоку.
Компетентность клеток можно повысить, используя соли кальциялибо совместно соли кальция, магния, рубидия. Кроме того, применяют глубокое замораживание и оттаивание, а также электропорацию (кратковременное воздействие электрического поля высокой напряженности, которое вызывает разрушение цитоплазматической мембраны с образованием пор).
Прочие статьи:
Значение насекомых
Положительная деятельность насекомых в природе в первую очередь выражается в опылении ими цветков растений (около 30% европейских цветковых растений опыляется насекомыми).
Велико значение насекомых, особенно термитов и муравьев, в почвоо ...
СЕМЕЙСТВО Коконопряды Lasiocampidae.
Семейство крупных или среднего размера ночных бабочек.
Отличаются присутствием не менее 2 добавочных жилок на переднем крае задних крыльев. Размах крыльев до 90 мм. Бабочки толстые, покрытые волосками, обычно желтой или коричневатой окра ...
Питание
Некоторые гусеобразные питаются животной пищей — рыбой, ракообразными, водными моллюсками и т.п. Большинство ищет пищу на водной поверхности или вблизи её. Есть, однако, виды, ныряющие более глубоко за водными растениями. Гуси и паламедеи ...