Клетка-реципиент—эта та среда, в которой может функционировать рекомбинантная ДНК в виде вектора. Такие клетки называют пермиссивными. К ним предъявляют следующие требования:
· не разрушаются чужеродной ДНК или РНК собственными ферментам;
· срабатывает механизм репликации вектора;
· проявляется выраженная активность промотера и/или терминатора транскрипции р-ДНК;
· отмечается полный сплайсиг м-РНК ;
· наблюдается эффективная трансляция м-РНК;
· нет выраженной активности пептидогидролаз, катализирующих реакций гидролиза экспрессируемых чужеродных белков.
Часто в качестве пермиссивных клеток используют Е. coli, Bacillus subtilis, В. stearothermophilus, В. brevis, Saccharomyces cerevisiae.
Для включения вектора в пермессивные клетки используют различные методы: трансформация, инфекция, микроинъекция.
Клетки, способные адсорбировать и поглощать вектор, называют компетентными. У таких клеток изменены свойства клеточной стенки: снижен поверхностный заряд и повышена чувствительность к осмотическому шоку.
Компетентность клеток можно повысить, используя соли кальциялибо совместно соли кальция, магния, рубидия. Кроме того, применяют глубокое замораживание и оттаивание, а также электропорацию (кратковременное воздействие электрического поля высокой напряженности, которое вызывает разрушение цитоплазматической мембраны с образованием пор).
Прочие статьи:
Строение глаза
Глаз можно назвать сложным оптическим прибором. Его основная задача -"передать" правильное изображение зрительному нерву.
Основные функции глаза:
· оптическая система, проецирующая изображение;
· система, воспринимающая и &qu ...
Философское значение теории относительности
1. Исключила из науки понятия абсолютного пространства и времени, как самостоятельных независимых от материи форм существования.
2. Показала зависимость пространственно-временных форм от характера движения и взаимодействия материальных с ...
Болезни плавательного пузыря
В течение последних десяти лет во многих хозяйствах Московской области наблюдается заболевание плавательного пузыря сеголетков карпа, которое проявляется в двух клинических формах.
I клиническая форма. В большинстве случаев болезнь прояв ...