В настоящее время разработано большое количество методов для введения клонированных последовательностей ДНК в клетки млекопитающих. Среди них преципитация фосфатом кальция или DEAE-декстраном, электропробой, использование инактивированных вирусов и слияние прокариотических и дрожжевых протопластов с клетками млекопитающих. Наиболее широкое распространение получила преципитация фосфатом кальция. Точный механизм захвата ДНК, ее включения в реципиентную клетку непонятен, однако известно, что лишь небольшое количество клеток в культуре реципиентов включают ДНК. По аналогии с бактериальной генетикой эти клетки получили название «компетентных». Количество включаемой ДНК – важнейшая характеристика используемой клеточной линии. Мышиные L-клетки включают несколько миллионов пар оснований экзогенной ДНК, человеческие фибробласты – только часть этого количества. Было проведено несколько экспериментов по выявлению максимальных размеров ДНК, передаваемой неповрежденной. Обычно не удается перенести интактную ДНК, размеры которой превышают 100 т. п. н. Неизвестно, зависит ли это от свойств клеток-реципиентов или определяется трудностями в получении таких больших фрагментов ДНК интактными. Недавние успехи в получении высокомолекулярных фрагментов ДНК позволяют проанализировать оба этих варианта.
Прочие статьи:
Рост и развитие глаза после рождения
Развитие глаза. К моменту рождения, даже у недоношенных, глаз вполне способен функционировать как орган зрения. Об этом свидетельствует двигательная реакция (откидывание головки назад, движения глаз, поворот головы) в ответ на включение э ...
Задачи современной селекции
Селекция в буквальном смысле этого слова означает отбор. Но в современном понимании селекция — это широкая комплексная наука, направленная в основном на повышение производительности сельскохозяйственного производства и базирующаяся не тол ...
Генетичеcкий механизм поддеpжания
детеpминиpованного cоcтояния
Одна из важнейших общебиологичеcких пpоблем, pешить котоpую помогут cтволовые клетки, – генетичеcкий механизм поддеpжания детеpминиpованного cоcтояния в ходе деления клеток и выхода их в диффеpенциpовку. Вcеpьез ее поcтавил еще Э. Хадоpн ...