Данная методика используется при исследовании волоса, на корневой части которого присутствуют влагалищные оболочки; это, как правило, бывает у вырванных жизнеспособных волос (см. рис. 1). Используют 20% взвесь ионообменной смолы Chelex, приготовленную в стерильной дистиллированной воде. Принцип метода заключается в гидролизе, "растворении" волоса при кипячении с ионообменной смолой Chelex, которая сорбирует различные примеси, и в том числе примеси белков.
Волос микроскопируют, отмывают (как описано выше), отрезают луковицу волоса с 2 - 3 мм стержня и помещают в пробирку "Эппендорф". В пробирку добавляют 100 мкл 20% взвеси ионообразной смолы Chelex. Выдерживают в термостате при температуре 56 °С в течение 12 ч (ночь). Встряхивают 5 - 10 с на вортексе при высокой скорости. Затем помещают пробирку с волосом в кипящую воду на 8 мин. Волос должен быть полностью погружен в раствор. Опять помещают на вортекс для встряхивания в течение 5 -10 с при высокой скорости.
Гидролизат волоса центрифугируют 2 - 3 мин при 10 000 - 15 000 об/мин. Супернатант используют для постановки реакции ПЦР. В реакцию берут не более 15 мкл образца при суммарном объеме реакционной смеси ПЦР 25 мкл.
Прочие статьи:
Перенос генов, опосредованный ДНК. Введение
В настоящее время разработано большое количество методов для введения клонированных последовательностей ДНК в клетки млекопитающих. Среди них преципитация фосфатом кальция или DEAE-декстраном, электропробой, использование инактивированных ...
Появление человека
С появлением человека разумного начался новый этап эволюционно-революционного развития природы, направленного на усложнение материального мира. Отличаясь от животных развитым сознанием, мышлением и речью, сформировавшимися в результате ко ...
Жиры и липоиды.
Жиры представляют собой соединения жирных высокомолекулярных кислот и трехатомного спирта глицерина. Жиры не растворяются в воде – они гидрофобны. В клетке всегда есть и другие сложные гидрофобные жироподобные вещества, называемые липоида ...