Синтез полипептидов, кодируемых клонированными сегментами эукариотической ДНК
Страница 4

Статьи » Продукты рекомбинации - характеристика и манипулирование » Синтез полипептидов, кодируемых клонированными сегментами эукариотической ДНК

г. Экспрессирующие векторы, используемые в клетках животных

Для экспрессии клонированных генов в клетках животных были сконструированы два типа векторов; в основе одного из них лежит геном SV40, а другого - геном папилломавируса крупного рогатого скота. Основные свойства этих двух систем вирусных векторов описаны в разд. 5.7. Векторы на основе папилломавирусов особенно полезны для синтеза больших количеств белка, а векторы на основе SV40 используются во многих экспериментах.

Типичные векторы содержат либо весь геном BPV, либо его часть, необходимую для стабильной трансформации хозяйских клеток, например мышиных клеток в культуре. Такие векторы часто включают эукариотический ген вместе с промотором, сигналом полиаденилирования и другими регуляторными областями. Между сайтом инициации транскрипции и стартовым кодоном трансляции находится удобный рестриктазный сайт. Когда в этот сайт встраивается определенная кодирующая последовательность, она транскрибируется с образованием соответствующей мРНК. Синтез этой мРНК начинается от стартового кодона транскрипции и заканчивается на сигнале полиаденилирования, находящемся во вставке или в векторной последовательности. Кодирующая последовательность должна содержать свой собственный стартовый и стоп-кодоны. Одним из преимуществ экспрессирующих векторов, созданных на основе BPV, является то, что трансформированные ими клетки сохраняются в культуре в течение многих месяцев. В результате непрерывного деления клеток постоянно синтезируется нужный белок. В одном из экспериментов в BPV-вектор была встроена предварительно клонированная кодирующая часть гена поверхностного антигена вируса гепатита В. Трансформированные клетки секретировали около 10 мг антигена на 1 л культуры за 24 ч.

Страницы: 1 2 3 4 


Прочие статьи:

Научная революция XVI-XVII вв. и становление классической науки
Отправной точкой научной революции, в результате которой появилась классическая наука и современное естествознание, стал выход книги Николая Коперника "О вращении небесных сфер" в 1543 г. Но гелиоцентрические идеи, высказанные т ...

Динозавры и птицы
В последние годы среди палеонтологов достигнут консенсус, что ближайшими родственниками птиц являются дейнонихозавры «ящеры с ужасными когтями» — инфраотряд, включающий в себя семейства дромаеозавров и троодонтид. Вместе эти три категории ...

Возникновение и смысл термина «зоны свободные от ГМО»
Официально «зона, свободная от ГМО» впервые прозвучало в 1998 г. в заявлении британского отделения Партии природного закона. 28 сентября 1998г. партия призвала власти графств Великобритании к созданию ЗСГМО. Это понятие включало в себя за ...

Разделы